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qPCR 實驗 Ct 值偏大或普通 PCR 產量低解析

日期:2023-08-14 00:50
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摘要:qPCR 實驗 Ct 值偏大或普通 PCR 產量低解析

逆轉錄后的 qPCR 實驗 Ct 值偏大或者普通 PCR 產量低。




1、RNA 模板質量差,需要重新制備 RNA 模板,可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質量。


2、 逆轉錄后的 cDNA 中含有高濃度的模板 RNA 和逆轉錄試劑成分,可能會對后續的PCR 產生抑制作用,所以可以適當梯度提高 cDNA 稀釋比例(通常來說可將 cDNA 原液稀釋5-10倍,其zui 佳模板加入量以擴增得到的 Ct 值在20-30個循環為好)。


3、 起始的 RNA 模板量低,需要減少稀釋倍數或增加 RNA 模板量。


4、 基因本身原因(復雜和長度),可以重新設計復雜基因的引物,避免復雜結構?;蛘哂萌椒ǔ绦蚧蜓娱L兩步法程序的延伸時間。


5、 逆轉錄或者定量產品性能差,可以通過做平行不用品牌產品對比實驗,對比逆轉錄產品性能。

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