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細胞提取液反復凍融方法

日期:2023-02-08 15:25
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摘要:細胞提取液反復凍融方法

 細胞提取液反復凍融方法:

1、 吸出培養板中的培養基,用胰蛋白酶消化細胞,然后加入適量的培養基將培養板上的細胞沖洗干凈。懸浮細胞可以省略該步驟。

2、 將細胞懸浮液收集到離心管中,在2-8℃下以1000×g離心5分鐘,然后吸去培養基,用預冷PBS洗滌細胞3次。

3、 加入適量的預冷PBS(建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。在6孔培養板(約1×106個細胞)中,每個孔加入150-250μL的PBS來重懸細胞。

4、 使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復凍融,重復凍融過程數次,直至細胞完全裂解。也可以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞。

5、 2-8℃下以1500×g離心10分鐘,去除細胞碎片,收集上清液,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。

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